Родился Джеймс Мастерс (James Marsters) в 1962 году, 20 августа, в Гринвилле, но его детство прошло в Модесто (оба города находятся в штате Калифорния). Будучи в четвертом классе, он принял участие в школьной постановке "Винни Пух". Это и послужило принятию решения стать актером. С тех пор он начинает заниматься в театральной группе, а также играть в разнообразных мюзиклах и пьесах. В 1980 году по окончании школы Джеймс продолжает обучение в Тихоокеанской консерватории актёрского мастерства, а также в Американской театральной консерватории. В 1987 году Мастерс перебрался в Чикаго. Его главная серьезная работа в театре - это роль Фердинанда, а выступление в 1989 году в качестве Робеспьера принесло ему номинацию на премию под названием Joseph Jefferson Award. С 1990 года актер живет в Сиэтле вместе с женой Лиан Дэвидсон, где основывает собственную труппу и много играет на сцене. При этом ему приходилось подрабатывать в одном из ночных клубов в Санта-Монике пением под гитару. Роль Спайка в сериале "Баффи - истребительница вампиров" прославила Мастерса. Он получил ее в 1997 году. Первоначально предполагалось, что он будет сниматься лишь в нескольких сериях второго сезона, но из-за того, что его герой полюбился зрителям, уже в четвертом сезоне он становится вровень с главными персонажами телесериала. К тому же, когда съемки подошли к концу, в 2003 году Джеймс "перебрался" в сериал "Ангел". Для роли Спайка ему нужно было говорить с британским акцентом. Этому навыку он научился у своего партнера по съемкам Энтони Стюарта Хэда. Также Мастерс снимался в таких сериалах, как "Тайны Смолвилля", "Без следа", "Обмани меня", "Тысячелетие", "Андромеда" и "Торчвуд", а также в кинолентах "P.S. Я люблю тебя", "Извилистая дорога" и т.д. Наряду с этим на протяжении двух лет (2003-2004) актер был участником рок-группы.